Ensaios em Formato de Placa e de Tubo

Os métodos do Ensaio de Imunoabsorção Enzimática (ELISA) com base em anticorpo têm sido amplamente utilizados em aplicações médicas desde o início dos anos 1970. Incontáveis estudos têm demonstrado a correlação entre os resultados do ELISA e metodologias tradicionais, como cromatografia gasosa (GC) e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC).

A maioria dos kits da EnviroLogix em formato de 96 poços (Placa) e kits de tubos (incluindo todos os ensaios ELISA de pesticidas) são ensaios competitivos. E como todos os imunoensaios competitivos, a concentração da amostra é inversamente proporcional ao desenvolvimento da coloração:

Cor mais escura = Menor concentração do analito sob suspeita

Cor mais clara = Maior concentração do analito sob suspeita

Nesses testes, resíduos de pesticidas na amostra competem com quantidades conhecidas de análogo de pesticida que teve sua enzima identificada (geralmente com peroxidase de rábano silvestre) para um número limitado de locais de ligação de anticorpos na superfície interna dos poços de teste.

Após um simples estágio de lavagem, o resultado da competição é visualizado em um estágio de desenvolvimento de coloração.

Observação: Certos testes não pesticidas utilizam um formato diferente para apresentar reação imunológica, designado ensaio “sandwich”. Nesses ensaios, uma coloração mais escura indica maior concentração do analito. Tome cuidado ao ler as instruções que acompanham cada teste para se certificar da interpretação apropriada.

 

Interpretando Imunoensaios ELISA

Os kits de placa e tubo da EnviroLogix são fornecidos com Calibradores (concentrações conhecidas do analito-alvo na solução) e com um Controle negativo (conhecido como sendo livre do analito-alvo), tanto para interpretação visual como instrumentada dos resultados do teste. Tais Padrões (Calibradores e Controle) apresentam formas distintivamente diferentes de coloração azul de acordo com as diferentes concentrações fornecidas (por exemplo: zero, 0,5 ppb (partes por bilhão), 1 ppb, 5 ppb, 10 ppb). Pela comparação da coloração da amostra em relação aos Padrões, a pessoa que realizar o teste poderá determinar visualmente a fixa de concentração da amostra, por exemplo, “entre 1 ppb e 5 ppb”. Tal interpretação é semiquantitativa.

A interpretação quantitativa pode ser realizada pela inserção dos micropoços em um “leitor de placa”, o qual mede precisamente a densidade ótica de todas as amostras e de todos os Padrões ao mesmo tempo. Usando o software fornecido com o leitor, o usuário, então, calcula a concentração da amostra a partir do Padrão.

Para uso em campo, um “leitor de tira” ou “minifotômetro” pode ser usado para processar uma tira de oito poços ou de doze poços de cada vez. Esse tipo de dispositivo é muito mais portátil e barato do que um leitor de placa, porém, ele exige maior manipulação manual.

Dispositivos Lateral Flow

Os dispositivos de teste lateral flow QuickStix e QuickTox, da EnviroLogix, empregam os mesmo princípios de imunoensaio que os formatos de placa e tubo, mas revestem os anticorpos e outros reagentes em uma membrana de nitrocelulose ao invés de dispô-los em poços ou tubos de ensaio. A amostra é adicionada em uma extremidade do dispositivo e o atravessa, por de ação capilar, até a outra extremidade. Ao passar ao longo da membrana, a amostra é exposta a zonas de anticorpos reativas ao analito-alvo. O ensaio QuickStix/QuickTox é projetado para desenvolver uma “linha de controle” próxima à extremidade mais longínqua do dispositivo.

 

Interpretação dos resultados com LFDs QuickStix

Caso não haja “linha de controle”, o teste não foi adequadamente processado e deverá ser repetido. Assim como nos formatos de placa e tubo, certos testes são “ensaios competitivos” e outros são designados “ensaios sandwich”. Por exemplo, os ensaios de pesticidas da EnviroLogix, sejam em placa, tubo ou QuickStix, são todos testes competitivos, enquanto os ensaios de endotoxina Bt são todos ensaios sandwich.

Em ensaios competitivos LFD, um resultado positivo é indicado pela ausência de uma linha na área de resultado de teste.

Em ensaios sandwich LFD, um resultado positivo é indicado pela presença de uma linha na área de resultado de teste.